Grippe A

Les antigènes du virus bien sûr, mais aussi une combinaison de substances activant l'immunité:l'adjuvant. C'est sur ce mélange à la réputation "sulfureuse" que se fera la différence.

Concrètement, pour protéger les individus avant qu'ils ne soient confrontés à ce virus, un vaccin pandémique doit répondre à deux obligations:

-étre disponible en grande quantité et dans minimum de temps.

-Immuniser le plus rapidement possible ceux qui le reçoivent.

"Début juillet l'OMS à recensé 33 projets différents de vaccins prêts à être développés dans 26 laboratoires , explique Marie Paul Kieny directrice de l'initiative pour la recherche sur les vaccins de l'OMS .

Il n'y aura donc pas un, mais plusieurs types de vaccins proposés."

Ce qui les différenciera ?

Principalement l'utilisation ou non d'un adjuvant.

Oui mais il y un "hic", après l'injection, bien que les liens ne sont pas clairement établis, on recense des cas de maladies auto-immune et d'autres neurologiques (En mars 1976 les u.s ont déclenchés une campagne de vaccination contre une grippe porcine, résultat, des morts paralysés recensés par la presse et les vaccinations se sont arrêtées en décembre pour une épidémie qui n'a finalement jamais eu lieu).

Le pour et le contre:

Vous faites le vaccin contre la grippe saisonnière, vous aurez au pire une semaine au lit avec h1n1...

Ou, vous faites le vaccin contre h1n1 et avec un risque faible certes vous pouvez contracter une maladie citée ci dessus.

source: Science et vie n°01105 et http://www.syndicat-infirmier.com/Vaccinat...fiance-des.html

Ou vous ne faites pas le vaccin, vous contractez la grippe H1N1, et manque de bol vos complicatiosn vous envoient en réanimation (mais bon, si vous aviez été vacciné, ça aurait aussi pu être la grippe normale, ou une méningite, ou...)

La semaine au lit avec la grippe A, c'est pas "au pire" mais "ce qui risque d'arriver, dans la majorité des cas"

Le H1N1 est moins dangereux que la grippe saisonnière, on meurt des complications sans soins et il faut au préalable avoir un problème respiratoire.

évidemment la question ne se pose pas pour une personne âgée etc...

Les personnes en bonne santé qui ont contacté H1N1 sans avoir fait le vaccin sont mortes peut être, non, un traitement banal suffit.

moi le H1N1 si je l'attrape je lui fais la tête au carré et on en parle plus

plus sérieusement : le vaccin est une forme atténuée du virus n'est ce pas ? or il me semble qu'à une époque on disait que ce vaccin n'a pas eu le temps de subir tous les tests labo.... présenterait en lui-même un danger donc....

alors que la source d'inquiétude se situe davantage autour de la possibilité de mutation du virus, et je crois bien que c'est ça qui inquiète

Je trouve qu'il en font Vraiment trop a la télé et dans les médias ! Ok yen a qui sont morts mais 20 francais sont morts du paludisme cette été pourtant personne na fait un drame !

La grippe A est peut ètre dangereuse mais faut pas éxagérer !

:blush:

http://blogs.myspace.com/index.cfm?fuseact...logId=516629050

:blush:

http://www.vesti.ru/doc.html?id=286170 :blush:

http://tf1.lci.fr/infos/sciences/sante/0,,4842895,00--.html

arretez de mettre des liens en langue etrangere .

on est dans un forum francophpne .

:blush:

:blush:

Les liens vers 'Myspace' ont une traduction en bas de page (40 langues env.).

A part ça, il existe la barre 'Goût-'Gueule' pour les non-voyants qu'il suffit d'astiquer de temps à autre.

Moilà !

arretez de mettre des liens en langue etrangere .

on est dans un forum francophpne . angry.gif

L'anglais est obligatoire à l'école :blush:

Mais maintenant tout le monde se débrouille en anglais...

arretez de mettre des liens en langue etrangere .

on est dans un forum francophpne .

Je l'ai fait exprès :)

Depuis un petit moment , j'ai remarqué qu'il y avait des posts ou des liens qui renvoient à une langue étrangère .

:blush: :)

Les liens vers 'Myspace' ont une traduction en bas de page (40 langues env.).

A part ça, il existe la barre 'Goût-'Gueule' pour les non-voyants qu'il suffit d'astiquer de temps à autre.

Moilà !

Autant mettre la version française directement car comme le dit très justement Athom et que si tu n'es pas non-voyant toi même , tu as du voir qu'ici c'est un forum francophone .

Après libre à chacun de voir les autres traductions dans toutes les langues,mais

on a pas à devoir traduire toutes les langues du monde .

Si tout le monde écrit dans sa langue , ça risque de devenir un vrai bordel pour se comprendre , déjà rien qu'en parlant dans la même langue on a du mal à le faire .

http://reveilletavie.over-blog.com/article-36886527.html

http://www.mooveon.net/blog.php?catID=15586

:blush: Hi !

Mardi, Novembre 03, 2009 Demande de brevet US 20090010962 - Genetically Engineered virus de la grippe et les utilisations, il Demande de brevet US 20090010962 - Genetically Engineered virus de la grippe porcine et leurs utilisations

La présente invention concerne, en général, à la grippe porcine atténués virus ayant une altération de la capacité de s'opposer aux cellulaire interféron (IFN) de réponse, et l'utilisation de ces virus atténués dans le vaccin et les formulations pharmaceutiques. En particulier, l'invention a trait à la grippe porcine atténués virus modifications tenant compte d'un gène NS1 porcine qui diminuent ou éliminent la capacité du produit du gène NS1 à la réponse IFN cellulaire. Ces virus se répliquent in vivo, mais montrent une diminution de réplication, la virulence et l'atténuation augmente, et sont donc bien adaptés pour une utilisation dans les vaccins à virus vivants, et les formulations pharmaceutiques.

Revendications

1. Un virus de la grippe porcine atténués comprenant une mutation dans un gène de la grippe porcine NS1 qui diminue la capacité du produit du gène NS1 à antagoniser la réponse interféron cellulaires, et permet au virus atténué, à une multiplicité d'infection de 0,001, à croître à des titres entre environ 3 fois et environ 7 fois plus faible que wild-type de la grippe porcine dans les cellules de porcs, tel qu'il est déterminé à environ 5 jours post-infection lorsque s'est propagée sous les mêmes conditions.

2. Le virus de la grippe porcine atténués de la revendication 1, dans lequel le virus atténué est génétiquement modifiés.

3. Le virus de la grippe porcine atténués de la revendication 1, dans lequel le virus atténué est un virus mutant ou réassortis.

4. Le virus de la grippe porcine atténués de la revendication 2, dans lequel le virus atténué est un virus chimériques exprimant une séquence hétérologue.

5. Le virus de la grippe porcine atténués de la revendication 2, dans lequel le virus atténué est un virus chimérique qui exprime un antigène tumoral.

6. Le virus de la grippe porcine atténués de la revendication 2, dans lequel le virus atténué est un virus chimérique qui exprime un épitope d'un agent pathogène étrangers.

7. Le virus de la grippe porcine atténués de la revendication 1, dans lequel des cellules de porc sont PK (D1) des cellules, PK (15) cellules, PK13, cellules NSK, LLC-PK1 cellules, les cellules LLC-PK1A, ESK-4 cellules, les cellules ST, PT -K75 cellules, PK-2a/CL 13 cellules ou des cellules SJPL.

8. (annulée)

9. Le virus de la grippe porcine atténués de la revendication 2, caractérisé en ce que la mutation est une délétion à l'extrémité C-terminale du gène NS1.

10. (annulée)

11. Un virus de la grippe porcine atténués comprenant un gène NS1 modification, dans lequel le virus de la grippe porcine atténués est TX/98/del 126, TX/98/del 99 ou TX/98/del 73.

12. Un virus de la grippe porcine atténués ayant un phénotype altéré interféron antagoniste, caractérisé en ce qu'il comporte un virus de la mutation dans le gène NS1 résultant en une délétion comprise entre les 105 résidus d'acides aminés carboxy administration et les 160 résidus d'acides aminés carboxy administration de ns1.

13. Le virus de la grippe porcine atténués de la revendication 12, dans lequel le virus est atténué par une mutation dans le gène NS1 résultant en une délétion de la totalité des résidus d'acides aminés de NS1 l'exclusion des résidus d'acides aminés 1-95, résidus d'acides aminés 1-90, amino des résidus acides 1-85, résidus d'acides aminés 1-80, résidus d'acides aminés 1-75, résidus d'acides aminés 1-73, résidus d'acides aminés 1-70, résidus d'acides aminés 1-65, ou des résidus d'acides aminés 1-60, et dans lesquels l'amino-terminale d'acides aminés est le numéro 1 et la mutation dans le gène NS1 confère un phénotype altéré interféron antagoniste.

14. (annulée)

15. Une formulation immunogène comprenant le virus atténué de la grippe porcine de la revendication 1, et un excipient physiologiquement acceptable.

16. Une formulation immunogène comprenant le virus atténué de la grippe porcine de la revendication 11 ou 12, et un excipient physiologiquement acceptable.

17. Une formulation pharmaceutique comprenant le virus atténué de la grippe porcine de la revendication 1, et un excipient physiologiquement acceptable.

18. Une formulation pharmaceutique comprenant le virus atténué de la grippe porcine de la revendication 11 ou 12, et un excipient physiologiquement acceptable.

19-20. (annulée)

21. La formulation selon la revendication 15, où le virus de la grippe porcine atténués est génétiquement modifiés.

22. La formulation selon la revendication 21, où le virus de la grippe porcine atténués est un virus chimériques exprimant une séquence hétérologue.

23-26. (annulée)

27. La formulation pharmaceutique selon la revendication 17, où le virus de la grippe porcine atténués est génétiquement modifiés.

28-29. (annulée)

30. La formulation pharmaceutique selon la revendication 27, où le virus de la grippe porcine atténués est un virus chimérique qui exprime un antigène tumoral.

31. Une méthode pour immuniser ou induire une réponse immunitaire chez un porc, comprenant l'administration audit de porcs une quantité efficace de la formulation selon la revendication 21.

32. Une méthode pour immuniser ou induire une réponse immunitaire d'un porc, comprenant l'administration audit de porcs une quantité efficace de la formulation selon la revendication 16.

33. Une méthode de traitement d'une infection par le virus de la grippe chez un porc, comprenant l'administration audit de porcs une quantité efficace de la formulation pharmaceutique selon la revendication 27.

34. Une méthode de traitement d'une infection par le virus de la grippe chez un porc, comprenant l'administration audit de porcs une quantité efficace de la formulation pharmaceutique selon la revendication 18.

35. Une méthode de traitement du cancer chez un porc, comprenant l'administration audit de porcs une quantité efficace de la formulation pharmaceutique selon la revendication 30.

36-40. (annulée)

41. Une méthode pour la production d'une préparation immunogène comprenant: (a) se propageant dans un substrat de l'atténué du virus de la grippe porcine de la revendication 1, et (b) la collecte de virus de la descendance, dans lequel le substrat est une cellule, une lignée de cellules ou des oeufs embryonnés.

42. Une méthode pour la production d'une préparation immunogène comprenant: (a) se propageant dans un substrat de l'atténué du virus de la grippe porcine de la revendication 11 ou 12; (b) la collecte de virus de la descendance; où le substrat est une cellule, une lignée de cellules ou des oeufs embryonnés.

43-56. (annulée)

57. Une cellule contenant le virus atténué de la grippe porcine de la revendication 1.

58. (annulée)

59. Une cellule contenant le virus de la grippe porcine de la revendication 11 ou 12.

60-69. (annulée)

70. Un oeuf embryonnés contenant le virus atténué de la grippe porcine de la revendication 1.

71-77. (annulée)

Description

[0001] application revendique le bénéfice de US Provisional Application No. 60/576, 418, déposée le 1 juin 2004, qui est intégrée aux présentes par renvoi dans son intégralité.

1. DOMAINE DE L'INVENTION

[0002] La présente invention concerne, en général, à la grippe porcine atténués virus ayant une altération de la capacité de s'opposer aux cellulaires interféron (IFN) en réponse, et l'utilisation de ces virus atténués dans le vaccin et les formulations pharmaceutiques. En particulier, l'invention a trait à la grippe porcine atténués virus modifications tenant compte d'un gène NS1 porcine qui diminuent ou éliminent la capacité du produit du gène NS1 à la réponse IFN cellulaire. Ces virus se répliquent in vivo, mais montrent une diminution de virulence et l'atténuation augmente, et sont donc bien adaptés pour une utilisation dans les vaccins à virus vivants, et les formulations pharmaceutiques.

2. HISTORIQUE

[0003] 2.1 virus de l'influenza

[0004] familles de virus enveloppés contenant des ARN simple brin du génome anti-sens sont classés en groupes ayant des génomes non segmenté (Paramyxoviridae, Rhabdoviridae, Filoviridae Borna et de maladie à virus) ou celles possédant des génomes segmentés (Orthomyxoviridae, Bunyaviridae et Arenaviridae). La famille des Orthomyxoviridae, décrite en détail ci-dessous, et utilisé dans les exemples ci-après, comprend le virus de la grippe, les types A, B et C virus, ainsi que Thogoto et les virus Dhori infectieuse du saumon l'anémie virus.

[0005] Les virions la grippe consiste en un noyau ribonucléoprotéique interne (une nucléocapside hélicoïdale) contenant le single-stranded RNA genome, et une enveloppe extérieure lipoprotéines doublé à l'intérieur d'une protéine de la matrice (M1). Segmentée du génome du virus grippal A est constitué de huit molécules (sept pour l'influenza C) de linéaire, de polarité négative, les ARN simple brin codant pour onze polypeptides, notamment: l'ARN-polymérase ARN dépendante des protéines (PB2, PB1 et PA) et la nucléoprotéine (NP), qui forment la nucléocapside, les protéines membranaires matrice (M1, M2), deux glycoprotéines de surface qui projet de l'enveloppe lipidique contenant: l'hémagglutinine (HA) et neuraminidase (NA), la protéine non structurale (NS1), protéine d'export nucléaire (NEP) et le facteur de pro-apoptotiques PB1-F2. Transcription et la réplication du génome a lieu dans le noyau et l'assemblage se fait par bourgeonnement de la membrane plasmique. Les virus peuvent réassortiment des gènes au cours d'infections mixtes.

[0006] adsorbe par le virus de la grippe HA pour sialyloligosaccharides dans les glycoprotéines membranaires des cellules et des glycolipides. é la suite de l'endocytose du virion, un changement de conformation de la molécule HA survient dans les endosomes cellulaires décapsidation qui facilite la fusion des membranes, déclenchant ainsi. La nucléocapside migre vers le noyau où ARNm viraux est transcrite. ARNm viraux est transcrit par un mécanisme unique dans lequel endonucléase virale clive la plafonné 5'-terminale à partir d'ARNm cellulaires hétérologues qui servent alors d'amorces pour la transcription de l'ARN viral par la transcriptase modèles virale. Transcriptions mettre fin à des sites de 15 à 22 bases à partir au bout de leurs modèles, où les oligo (U) des séquences agissent comme signaux pour l'ajout de poly (A) tracts. Sur les huit molécules d'ARN viral ainsi produites, six sont des messages monocistroniques qui sont directement traduit dans les protéines représentant HA, NA, NP et les protéines de la polymérase virale, PB2, PB1 et PA. Les deux autres transcriptions subir d'épissage, chacune de deux cédant ARNm qui sont traduites dans les cadres de lecture différents pour produire des M1, M2, NS1 et la PNE. Le segment de code pour une protéine PB1 seconde, le PB1-protéine non structurale F2, à l'aide d'un ATG alternative. En d'autres termes, les huit segments de code d'ARN viral pour onze protéines: neuf structurelle et de deux non structuraux. Un résumé des gènes du virus de la grippe et de leurs produits protéiques est montré dans le tableau I ci-dessous.

TABLE-US-00001 TABLEAU I GENOME DU VIRUS DE LA GRIPPE segments d'ARN ET CESSIONS DE CODAGE^un Longueur_d Longueur_b Encodé (Amino Molecules segment (nucléotides) POLYPEPTIDE_c Acids) Per Virion Commentaires 1 2341 PB2 759 30-60 ARN composante transcriptase; hôte cellulaire cap ARN fixation 2 2341 PB1 757 30-60 ARN composante transcriptase; initiation de la transcription PB1-F2 87 facteur pro-apoptotiques 3 2233 PA 716 30-60 transcriptase ARN composante Hémagglutinine; trimère; Envelope 4 1778 HA 566 500 glycoprotéine; médiatise l'attachement aux cellules Nucleoprotein; associé avec 5 1565 NP 498 1000 ARN; composante structurelle de l'ARN transcriptase 6 1413 NA 454 100 Neuraminidase; tétramère; glycoprotéine d'enveloppe 7 1027 m₁ 252 3000 protéine de la matrice; lignes à l'intérieur de l'enveloppe M₂ 96? Structurale des protéines de la membrane plasmatique; ARNm épissé 8 890 NS₁ 230 protéines non structurales; fonction inconnue NEP 121? Protéine d'export nucléaire; ARNm épissé ^aAdapted Agneau de RA et PW Choppin (1983), Annual Review of Biochemistry, Volume 52, 467-506. ^BPour A/PR/8/34 souche ^cDetermined par des approches biochimiques et génétiques ^dDetermined par l'analyse de séquences de nucléotides et séquençage protéique

[0007] Le pouvoir pathogène des virus influenza est modulée par le virus multiples et facteurs de l'hôte. Parmi les facteurs de l'hôte que les infections à virus de combat, le type I interferon (IFN / β) système constitue un puissant mécanisme de défense antivirale innée qui a été établi relativement tôt dans l'évolution des organismes eucaryotes (Garcia-Sastre, 2002, Microbes Infect 4:647 -- 55). L'IFN antiviral / β système comprend trois étapes principales: (i) la détection de l'infection virale et IFN / β sécrétion, (ii) la fixation de IFNa / β à ses récepteurs et l'induction transcriptionnelle de IFNa / β-gènes stimulés, et (iii) synthèse d'enzymes et protéines antivirales. La plupart des virus, cependant, ont acquis une information génétique spécifique de codage IFNa / β molécules antagonistes qui bloquent effectivement l'une ou plusieurs étapes de l'IFN antiviral / β système. Les virus grippaux A exprimer une protéine non structurale dans les cellules infectées, la protéine NS1 (décrits en détail, infra), qui contrebalance le IFNa cellulaire / β de réponse (Garcia-Sastre et al., 1998, Virology 252:324-30).

[0008] Le génome du virus de l'influenza A contient huit segments d'ARN simple brin de polarité négative, codant pour deux protéines non structurales et neuf structurelles. La protéine non structurale NS1 est abondante dans les cellules infectées par le virus de la grippe, mais n'a pas été détecté dans les virions. NS1 est une phosphoprotéine trouve dans le noyau au début lors de l'infection et aussi dans le cytoplasme à des heures plus tard, du cycle viral (King et al., 1975, Virology 64: 378). Des études avec thermosensibles (ts) mutants de la grippe transportant des lésions dans le gène NS a suggéré que la protéine NS1 est un régulateur transcriptionnel et post-transcriptionnelle des mécanismes par lequel le virus est capable d'inhiber l'expression génique de la cellule hôte et de stimuler la synthèse des protéines virales. Comme beaucoup d'autres protéines qui régulent les processus post-transcriptionnel, la protéine NS1 interagit avec des séquences d'ARN spécifiques et des structures. La protéine NS1 a été signalé pour se lier à différentes espèces d'ARN, notamment: ARNv, le poly-A, U6 ARNsn, région 5 'non traduite du ARNm viraux et DS ARN (Qiu et al., 1995, RNA 1: 304; Qiu et al ., 1994, J. Virol. 68: 2425; Hatada Fukuda 1992, J Gen Virol. 73:3325-9. Expression de la protéine NS1 à partir d'ADNc dans les cellules transfectées a été associé à plusieurs effets: l'inhibition du transport nucléo-cytoplasmique de ARNm, l'inhibition de l'épissage, l'inhibition de l'hôte de polyadénylation de l'ARNm et la stimulation de la traduction des ARNm viraux (Fortes, et al., 1994, EMBO J. 13: 704; Enami et al., 1994, J. Virol. 68: 1432; de la Luna et al., 1995, J. Virol. 69:2427; Lu et al., 1994, Genes Dev. 8:1817; Park et al., 1995, J. Biol. Chem. 270, 28433; Nemeroff et al., 1998, Mol. Cell. 1:1991; Chen et al., 1994, EMBO J. 18:2273-83). En particulier, la protéine NS1 possède trois domaines qui ont été rapportés d'avoir un certain nombre de fonctions de réglementation pendant l'infection par le virus de grippe. L'amino-terminal de 73 acides aminés sont responsables de la fixation d'ARN (Qian et al., 1995, RNA 1:948-956), notamment des ARN double brin, qui confère au virus la capacité d'échapper à la interféron α / β de réponse (Donelan et al., 2003, J. Virol. 77:13257-66). La partie centrale de la protéine interagit avec la traduction 4GI eukaryotic initiation factor préférentiels facilitant la traduction des ARNm viraux sur des ARNm d'accueil (Aragon et al., 2000, Mol. Cell. Biol. 20:6259-6268). La carboxy-terminale ou le domaine effecteur a été montré pour empêcher la maturation des ARNm d'accueil, en particulier, l'inhibition de l'hôte de polyadénylation ARNm (Nemeroff et al., 1998, Mol. Cell. 1:991-1000), la liaison aux poly (A) queues d'exportation inhibant ARNm nucléaire (Qiu et Krug, 1994, J. Virol. 68:2425-2432) et l'inhibition de épissage (Lu et al., 1994, Genes Dev. 8:1817-1828).

[0009] Des études du virus de la grippe humaine recombinante dépourvues du gène NS1 (delNS1) a montré que ce virus ne peut se répliquer dans l'IFN-systèmes incompétents tels que STAT1-/ - des souris ou des cellules Vero: ainsi la protéine NS1 est responsable de la NIA activité antagoniste ( Garcia-Sastre et al., 1998, Virology 252:324-330). En outre, il a été montré que les virus de la grippe humaine avec des protéines tronquées NS1 sont atténuées dans les souris (Egorov et coll., 1998, J. Virol. 72:6437-6441) et offrent une protection contre une épreuve de type sauvage (Talon et al., 2000, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97:4309-4314).

[0010] 2.2 virus de la grippe porcine

[0011] La grippe porcine (SI) est une maladie respiratoire aiguë de l'espèce porcine, provoquée par des virus A de la grippe. Sa gravité dépend de nombreux facteurs, notamment l'âge d'accueil, la souche du virus et les infections secondaires (Easterday, 1980, Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci 288:433-7). Les virus grippaux A sont segmentés négative virus à ARN et ne peut être isolé à partir d'un certain nombre d'espèces hôtes autres animaux, y compris les oiseaux, les humains, les chevaux, les baleines, et le vison. Bien que l'ensemble des virus de la grippe rarement franchir la barrière des espèces, des segments de gènes peuvent franchir cette barrière à travers le processus de réassortiment génétique, ou Maj génétique. Depuis porcs soutenir la transposition des deux grippes aviaire et humaine au virus A (Kida et al., 1994, J Gen Virol 75:2183-8), ils ont été postulées à jouer un rôle important dans la transmission inter-espèces en agissant comme un «creuset "d'un réassortiment entre des virus spécifiques aux différentes espèces hôtes (SCHOLTISSEK, 1994, Eur J Epidemiol 10:455-8). Cette mai conduire à la génération de nouveaux virus grippaux capables de franchir la barrière des espèces pour les humains. Il existe trois sous-types de virus SI (SIV) qui circule actuellement chez les porcs aux états-Unis: H1N1, H3N2 et H1N2 (Olsen, 2002, Virus Res 85:199-210; Karasin et al., 2002, J Clin Microbiol 40:1073 -9; Karasin et al., 2000, Virus Res 68:71-85; Olsen et al., 2000, Arch Virol 145:1399-419; Webby et al., 2000, J Virol 74:8243-51; Webby et al., 2001, Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci 356:1817-28; Zhou, 2000, Vet Microbiol 74:47-58). Avant 1998, principalement "classique" SIV H1N1 ont été isolés de porcs aux états-Unis (Kida et al., 1994, J Gen Virol 75:2183-8; SCHOLTISSEK, 1994, Eur J Epidemiol 10:455-8; Olsen et al ., 2000, Arch Virol. 145:1399-419). En 1998, les SIV du sous-type H3N2 ont été isolés dans plusieurs états des états-Unis. Ces virus ont été générés par réassortiment entre porcine, aviaire et des virus classiques, ils sont en pleine évolution et en général ils provoquent des maladies plus graves que les SIV classique H1N1.

[0012] La pathogénicité des virus grippaux est modulée par le virus multiples et facteurs de l'hôte. Parmi les facteurs de l'hôte que les infections à virus de combat, le type I interferon (IFN / β) système constitue un puissant mécanisme de défense antivirale innée qui a été établi relativement tôt dans l'évolution des organismes eucaryotes (Garcia-Sastre, 2002, Microbes Infect 4:647 -- 55). L'IFN antiviral / β système comprend trois étapes principales: (i) la détection de l'infection virale et IFN / β sécrétion, (ii) la fixation de IFNa / β à ses récepteurs et l'induction transcriptionnelle de IFNa / β-gènes stimulés, et (iii) synthèse d'enzymes et protéines antivirales. La plupart des virus, cependant, ont acquis une information génétique spécifique de codage IFNa / β molécules antagonistes qui bloquent effectivement l'une ou plusieurs étapes de l'IFN antiviral / β système. Les virus grippaux A exprimer une protéine non structurale dans les cellules infectées, la protéine NS1, qui contrebalance le IFNa cellulaire / β de réponse (Garcia-Sastre et al., 1998, Virology 252:324-30).

[0013] infection grippale chez le porc a été signalé en 1918 et les premiers virus de la grippe porcine ont été isolés chez des porcs en 1930 (Shope, RE, 1931, J. Exp. Med. 54:373-385). Ces premiers isolats ont été les précurseurs de ce qui est reconnu comme la lignée de l'espèce porcine H1N1 de l'influenza A virus. De 1930 aux années 1990, la grippe chez le porc nord-américain était due presque exclusivement par l'infection à virus H1N1 porcine. Un changement radical de la configuration de la grippe porcine a commencé vers 1997, quand une augmentation inattendue et importante de la séropositivité H3 (8%) a été détecté, et les virus H3N2 a commencé à être isolés des porcs dans les deux aux Etats-Unis et le Canada (Olsen et coll., 2000, Arch. Virol. 134:1399-1419). En outre, réassortiment génétique entre les virus H3N2 et porcine virus H1N1 a entraîné la détection du virus H1N2 de la deuxième génération réassorti (Karasin et al., 2000, J. Clin. Microbiol. 38:2453-2456; Karasin et al., 2002, J. Clin Microbiol. 40:1073-1079). En outre, les virus H4N6 d'origine aviaire de canards ont été isolés à partir de porcs au Canada (Karasin et al., 2000, J. Virol. 74:9322-9327). La production de ces nouveaux virus, en plus des variantes décrites dérive antigénique du virus H1N1 de la grippe porcine, d'introduire le potentiel vétérinaire et humaine implications pour la santé publique.

[0014] En 1998, une nouvelle souche du virus de la grippe à des porcs qui bénéficiait de l'immunité peu éc¿uré chaque porc dans un opération de 2400 animaux. Bien qu'il n'y ait eu qu'un seul sous-type de grippe qui a rendu malades des porcs en Amérique du Nord depuis 1930, au cours des dernières années, une succession rapide de nouveaux virus de la grippe a été considérable à 100 millions de porcs en Amérique du Nord. Après des années de stabilité, de l'Amérique du Nord virus de la grippe a sauté sur une piste rapide, évolutive, mettant en évidence les variantes chaque année. Cela a eu non seulement un effet indésirable sur la Fanning Industrie et un impact économique négatif, mais, il est également préoccupé par les experts que l'évolution de la grippe porcine augmente la probabilité d'un nouveau virus qui se posera est transmissible entre humains. Heureusement, les souches de porcs qui sont apparus en Amérique du Nord à ce jour ne semble pas facilement infecter les humains.

[Virus 0015] 2.3 atténué

[0016] vaccins à virus inactivés sont préparés en «tuant» le pathogène viral, par exemple, par traitement thermique ou le formol, de sorte qu'il n'est pas capable de se reproduire. Des vaccins inactivés ont une utilité restreinte parce qu'ils ne fournissent pas une immunité durable et, par conséquent, offrent une protection limitée. Une approche alternative pour produire des vaccins à virus implique l'utilisation de vaccins à virus vivants atténués. Virus atténués sont capable de se reproduire mais ne sont pas pathogènes, et, par conséquent, de fournir une immunité plus durables et offrent une meilleure protection. Toutefois, les méthodes conventionnelles pour la production de virus atténués implique l'isolement chance d'accueillir mutants gamme, dont beaucoup sont sensibles à la température, par exemple, le virus est repiquées par les hôtes naturels, et les virus des descendants qui sont immunogènes, mais non pathogènes, sont sélectionnés.

[0017] Un substrat classique pour isoler et de plus en plus les virus grippaux à des fins de vaccin sont les oeufs embryonnés de poulet. Les virus grippaux sont généralement cultivés pendant 2-4 jours à 37 ° C en 10-12 jours oeufs vieux. Bien que la plupart des isolats primaires de l'homme de virus grippaux A et B se développent mieux dans le sac amniotique des embryons, après 2 à 3 passages des virus se sont adaptées à se développer dans les cellules de la cavité allantoïde, qui est accessible depuis l'extérieur de la oeufs (Murphy, BR, et RG Webster, 1996. orthomyxovirus pp. 1397-1445. En Fields Virology. Lippincott-Raven PA).

[0018] technologie de l'ADN recombinant et génétique génie techniques, en théorie, ne permette une meilleure approche de produire un virus atténué puisque les mutations spécifiques pourraient être délibérément conçue dans le génome viral. Toutefois, les altérations génétiques nécessaires pour l'atténuation des virus ne sont pas connus ou prévisibles. En général, les tentatives d'utiliser la technologie de l'ADN recombinant à l'ingénieur des vaccins viraux ont surtout été dirigés vers la production de vaccins sous-unitaires qui ne contiennent que les sous-unités protéiques de l'agent pathogène impliqué dans la réponse immunitaire, exprimée dans des vecteurs viraux recombinants comme le virus de la vaccine ou baculovirus . Plus récemment, des techniques de recombinaison de l'ADN ont été utilisées dans une tentative de produire des mutants de virus de l'herpès ou la suppression poliovirus qui imitent les virus atténués présents dans la nature ou connus mutants gamme d'hôtes. Jusqu'en 1990, les virus à ARN brin négatif ne se prêtaient pas à mon site une manipulation spécifique à tous, et ne pouvaient donc pas être génétiquement modifiés.

[0019] Bien que ces virus sont bénéfiques, car elles sont immunogènes et non pathogènes, elles sont difficiles à propager dans les substrats traditionnels aux fins de fabrication de vaccins. En outre, les virus atténués mai posséder des caractéristiques de virulence qui sont si doux que de ne pas permettre à l'hôte d'une réponse immunitaire suffisante pour relever les défis ultérieurs.

[0020] virus grippaux humains ne réplique pas efficace chez les oiseaux, et vice versa en raison des différences dans les récepteurs qui lient les virus. En revanche, les porcs sont particulièrement sensibles à l'infection avec des virus humains et aviaires, parce qu'ils possèdent des types de récepteurs présents à la fois chez les humains et les virus de la grippe aviaire. En conséquence, les porcs ont été émis l'hypothèse d'être le «creuset» hôtes d'un réassortiment du virus aviaire de l'homme et il est l'appui de cette théorie de plusieurs études. Voir, par exemple, Shu et al., 1994, Virology 202:825-33; SCHOLTISSEK, 1990, Med. Principes Pract. 2:65-71; Zhou et al., 1999 J. Virol. 73:8851-6. Ce mélange favorise la génération de nouvelles souches de virus de la grippe humaine et l'initiation des pandémies de grippe.

[0021] inactivé ou "tué" des préparations de virus de la grippe sont les vaccins contre la grippe seul actuellement homologué aux états-Unis. Une approche alternative pour produire des vaccins à virus à l'vaccins à virus inactivé dans lequel l'agent pathogène du virus est "tué", implique l'utilisation des vaccins à virus vivant atténué qui sont capable de se reproduire mais ne sont pas pathogènes. Les vaccins vivants qui sont administrés par voie intranasale mai ont des avantages sur leurs homologues inactivés. Tout d'abord, les vaccins vivants sont pensés pour induire une meilleure réactivité croisée cytotoxicité à médiation cellulaire, ainsi que d'une réponse humorale, offrant une meilleure protection que les vaccins inactivés (Gorse et Belshe, 1990, J. Clin. Microbiol. 28:2539-2550, et Gorse et al., 1995, J. Infect. Dis. 172:1-10). Deuxièmement, les vaccins vivants ont aussi l'avantage de l'administration intranasale qui évite l'enflure et la douleur musculaire, associé parfois à l'administration intramusculaire de vaccins inactivés adjuvant. Ces vaccins vivants ont été signalés pour non seulement des réponses humorale contre le virus de la grippe homotypique mais aussi crossreactive cytotoxicité à médiation cellulaire. D'autres avantages des vaccins vivants sont la facilité d'administration par voie nasale, l'induction de l'immunité des muqueuses, plus longtemps une immunité durable, et ses coût efficacité. Ce sont là autant de considérations importantes quant au potentiel de vaccins contre la peste grippe.

[0022] Ainsi, les vaccins nouveaux et plus efficaces et les préparations immunogènes pour la prévention des infections du virus de la grippe porcine générés par ces technologies sont nécessaires.

3. RéSUMé DE L'INVENTION

[0023] La présente invention a atténué les virus de la grippe porcine ayant une altération de la capacité de s'opposer aux cellulaires interféron (IFN) en réponse, les méthodes pour produire des virus atténués telles la grippe porcine et l'utilisation de ces virus dans le vaccin et les formulations pharmaceutiques. Ces virus sont capables de générer une réponse immunitaire et la création d'une immunité, mais ne causant pas la maladie ou causant moins et / ou moins sévères symptômes, De la virulence à savoir, les virus ont diminué. Par conséquent les candidats, elles sont idéales pour les vaccins à virus vivants. En outre, les virus atténués peuvent induire une réponse IFN robuste qui a d'autres conséquences biologiques in vivo, offrant une protection contre les maladies infectieuses ultérieures et / ou induire des réponses antitumorales. Par conséquent, les virus atténués peuvent être utilisés pharmaceutiquement, pour la prévention ou le traitement d'autres maladies infectieuses et / ou IFN-maladies traitables.

[0024] L'invention est basée, en partie, sur la découverte des requérants selon laquelle les virus de la grippe porcine conçu pour contenir ou contenant une délétion (s) dans le gène NS1 avez une altération de la réplication par rapport à la souche sauvage de type virus de l'influenza porcine comme en témoigne par moins du poumon lésions à l'infection de porcs, de réduction des titres viraux dans le liquide de lavage broncho-alvéolaire (LBA) et la détection réduite de virus sur des prélèvements nasaux. Curieusement, et contrairement aux résultats observés avec le virus de la grippe humaine chez des souris modèles, la longueur de la protéine NS1 n'est pas corrélé avec le niveau d'atténuation du virus de la grippe porcine. Les demandeurs ont découvert que, avec la grippe porcine, un virus mutant avec la plus courte protéine NS1 est le moins atténuée. En d'autres termes, la grippe porcine virus contenant des délétions plus courtes dans l'exposition gène NS1 une atténuation supérieure in vivo que les virus de la grippe porcine contenant des délétions plus longtemps dans leur gène NS1, porcine ou les virus grippaux de type sauvage. Les demandeurs ont en outre découvert que le virus recombinant de la grippe porcine sont diminuées dans leur capacité à inhiber la production d'IFN in vitro, et ils ne se répliquent pas aussi efficacement que la souche recombinante parentale en 10-day-old oeufs de poule embryonnés, dans des cellules MDCK, au PK - 15 cellules ou dans un modèle de porc in vivo. Bien que n'ayant pas l'intention d'être lié à une quelconque théorie ou une explication pour le mécanisme d'action du virus de la grippe porcine de mutants de délétion NS1 in vivo, les caractéristiques des virus atténués sont probablement en raison de leurs niveaux d'expression de la protéine NS1, leur capacité à induire une forte cellulaires réponse IFN, et leur capacité affaiblie à antagoniser une telle réponse. Toutefois, les propriétés bénéfiques de ces virus mai ne pas être entièrement attribuable à leur effet sur la réponse interféron cellulaire. En effet, des altérations dans d'autres activités associées à NS1, tels que, l'altération de épissage, l'inhibition de polyadénylation ARNm cellulaires, le poly (A) contenant de l'ARNm du transport nucléocytoplasmique et la stimulation de la synthèse des protéines virales, mai contribuer au phénotype atténué désiré réalisées par l'introduction de mutations dans le gène NS1 du virus de la grippe.

[0025] Un atténué du virus de la grippe porcine de la présente invention comprend une mutation dans un gène de la grippe porcine NS1 qui diminue la capacité du produit du gène NS1 à antagoniser la réponse interféron cellulaire. Dans un mode de réalisation, un virus atténué de la grippe porcine de l'invention comprend un génome constitué d'une mutation dans un gène de virus de la grippe porcine NS1 qui diminue la capacité du produit du gène NS1 se mettre à dos une réponse interféron cellulaires, et permet au virus atténué, à une multiplicité d'infection (MOI) comprise entre 0,0005 et 0,001, 0,001 et 0,01, 0,01 et 0,1, ou 0,1 et 1, ou à une MOI de 0.0005, 0.0007, 0.001, 0.005, 0.01, 0.05, 0.1, 0.5, 1.0, 1.5, 2.0, 2.5, 3.0, 3.5, 4.0, 4.5, 5.0, 5.5 ou 6.0, pour passer à des titres compris entre environ 1 à environ 100 fois, environ 5 à environ 80 fois, environ 20 à environ 80 fois, soit environ 40 à environ 80 fois d'environ 1 à environ 10 fois, environ 1 à environ 5 fois, environ 1 à environ 4 fois, soit environ 1 à environ 3 fois, environ 1 à environ 2 fois, environ 3 à environ 15 fois, soit environ 1, 2, 3 , 4, 5, 6, 7, 8, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 ou 100 fois plus faible que sauvages-virus de l'influenza de type dans les cellules (par exemple, les cellules d'un être humain (par exemple, PERC6 une lignée cellulaire de producteurs issus de rétinoblastes embryonnaires humaines transformées par la région E1 de l'adénovirus 5), la souris, le poulet (par exemple, les fibroblastes d'embryons de poulet) , rat, oiseaux, ou d'un porc (par exemple, PK (D1) des cellules, PK (15) des cellules, les cellules PK13, les cellules de NSK, LLC-PK1 cellules, les cellules LLC-PK1A, ESK-4 cellules, les cellules ST, PT-K75 cellules , PK-2a/CL 13 ou cellules SJPL)), tel qu'il est déterminé à environ 2 à 10 jours, 3 à 7 jours, 3 à 5 jours, ou 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 jours post-infection lorsque s'est propagée sous les mêmes conditions. Les titres des atténué and wild-type de virus de la grippe porcine peut être déterminé en utilisant une technique bien connue dans l'art ou décrits aux présentes, (par exemple, les tests d'hémagglutination, les dosages de la plaque, la dose de culture de tissus infectieuses 50 (DICT 50), oeuf dose infectieuse 50 ( EID50), etc) et le virus peut se propager dans les conditions décrites ci-après ou bien connus dans l'art (par exemple dans des cellules de porc, de cellules MDCK (par exemple, en MEM, 10% v / v de sérum de veau foetal (FCS), 1% de pénicilline / streptomycine à 37 ° C dans 5% de CO₂ incubateur humidifié) ou des ¿ufs embryonnés de poule (par exemple, dans un incubateur à l'arrêt à 37 ° C avec 55% d'humidité relative). Sinon, le virus peut se propager dans les cellules (par exemple dans des cellules de porc, de cellules MDCK, etc) qui sont cultivés en milieu sans sérum ou de sérum réduite (par exemple, la trypsine TPCK moyenne).

[0026] Dans un mode particulier, un virus atténué de la grippe porcine de l'invention comprend un génome constitué d'une mutation dans un gène de virus de la grippe porcine NS1 qui diminue la capacité du produit du gène NS1 se mettre à dos une réponse interféron cellulaires, et permet au virus atténué , à une multiplicité d'infection (MOI) comprise entre 0,0005 et 0,001, 0,001 et 0,01, 0,01 et 0,1, ou 0,1 et 1, ou à une MOI de 0.0005, 0.0007, 0.001, 0.005, 0.01, 0.05, 0.1, 0.5, 1.0, 1.5, 2.0, 2.5, 3.0, 3.5, 4.0, 4.5, 5.0, 5.5 ou 6.0, pour passer à des titres compris entre environ 1 à environ 100 fois, environ 5 à environ 80 fois, environ 20 à environ 80 fois, soit environ 40 à environ 80 fois, environ 1 à environ 10 fois, environ 1 à environ 5 fois, environ 1 à environ 4 fois, soit environ 1 à environ 3 fois, environ 1 à environ 2 fois, environ 3 à environ 15 fois, soit environ 1 , 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 ou 100 fois plus faible que wild-type de virus de la grippe dans les cellules (par exemple, les cellules d'un être humain (par exemple, PERC6, une lignée cellulaire de producteurs issus de rétinoblastes embryonnaires humaines transformées par la région E1 de l'adénovirus 5), la souris, le poulet (par exemple, fibroblastes d'embryons de poulet), le rat, les oiseaux, ou d'un porc (par exemple, PK (D1) des cellules, PK (15) cellules, PK13, cellules NSK, LLC-PK1 cellules, les cellules LLC-PK1A, ESK-4 cellules, ST cellules, PT-cellules K75, PK-2a/CL 13 ou cellules SJPL)), tel qu'il est déterminé à environ 2 à 10 jours, 3 à 7 jours, 3 à 5 jours, ou 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 jours post-infection lorsque s'est propagée sous les mêmes conditions. Les titres des atténué and wild-type de virus de la grippe porcine peut être déterminé en utilisant une technique bien connue dans l'art ou décrits aux présentes, (par exemple, les tests d'hémagglutination, les dosages de la plaque, etc) et le virus peut se propager dans les conditions décrites dans les présentes ou bien connu dans la technique (par exemple, dans des cellules de porc, de cellules MDCK (par exemple, en MEM, 10% v / v de sérum de veau foetal (FCS), 1% de pénicilline / streptomycine à 37 ° C dans 5% de CO₂ incubateur humidifié) ou des ¿ufs embryonnés de poule (par exemple, dans un incubateur à l'arrêt à 37 ° C avec 55% d'humidité relative).

[0027] Le virus de la grippe porcine utilisé conformément à l'invention mai être choisi parmi les souches d'origine naturelle, des variantes ou des mutants; virus mutant (par exemple, les virus générés par l'exposition à des mutagènes, des passages répétés et / ou le passage en non-hôtes permissive); réassortants, et / ou des virus génétiquement modifiés (par exemple, en utilisant la "génétique inverse" et helper-plasmide libre-based techniques) ayant le phénotype recherché - à savoir, une capacité réduite de la réponse IFN cellulaire. Les souches d'origine naturelle, variantes ou mutants, réassortiments et / ou des virus génétiquement avec le phénotype recherché antagoniste de l'interféron peuvent être choisis en fonction de la croissance différentielle dans les cellules (par exemple, les cellules d'un être humain (par exemple, PERC6, une lignée cellulaire de producteurs issus de l'homme embryonnaires rétinoblastes transformé avec la région E1 de l'adénovirus 5), la souris, le poulet (par exemple, les fibroblastes d'embryons de poulet), le rat, les oiseaux, ou d'un porc (par exemple, PK (D1) des cellules, PK (15) cellules, PK13, cellules NSK, cellules LLC-PK1, cellules LLC-PK1A, ESK-4 cellules, les cellules ST, PT-K75 cellules, PK-2a/CL 13 ou cellules SJPL)) dans les autres tests décrits ci-dessous. Dans certaines réalisations, le virus de la grippe porcine de l'invention sont génétiquement les virus. Dans d'autres réalisations, le virus de la grippe porcine de l'invention sont pas d'origine naturelle des souches, des variantes ou des mutants et / ou réassortiments.

[0028] Dans un mode particulier, un virus atténué de la grippe porcine de l'invention comprend un génome constitué d'une mutation dans un gène de virus de la grippe porcine NS1 qui diminue la capacité du produit du gène NS1 se mettre à dos une réponse interféron cellulaires, et permet au virus atténué à une multiplicité d'infection (MOI) comprise entre 0,0005 et 0,001, 0,001 et 0,01, 0,01 et 0,1, ou 0,1 et 1, ou à une MOI de 0.0005, 0.0007, 0.001, 0.005, 0.01, 0.05, 0.1, 0.5, 1.0, 1.5, 2.0, 2.5, 3.0, 3.5, 4.0, 4.5, 5.0, 5.5 ou 6.0, pour passer à des titres compris entre environ 1 à environ 100 fois, environ 5 à environ 80 fois, environ 20 à environ 80 fois, soit environ 40 à environ 80 fois, environ 1 à environ 10 fois, environ 1 à environ 5 fois, environ 1 à environ 4 fois, soit environ 1 à environ 3 fois, environ 1 à environ 2 fois, environ 3 à environ 15 fois, soit environ 1 , 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 ou 100 fois plus faible que wild-type de virus de la grippe dans les cellules (par exemple, les cellules d'un être humain (par exemple, PERC6, une lignée cellulaire de producteurs issus de rétinoblastes embryonnaires humaines transformées par la région E1 de l'adénovirus 5), la souris, le poulet (par exemple, fibroblastes d'embryons de poulet), le rat, les oiseaux, ou d'un porc (par exemple, PK (D1) des cellules, PK (15) cellules, PK13, cellules NSK, LLC-PK1 cellules, les cellules LLC-PK1A, ESK-4 cellules, ST cellules, PT-cellules K75, PK-2a/CL 13 ou cellules SJPL)) tel que déterminé par un test d'hémagglutination BALF de porcs ou de surnageants de cellules de porc d'environ 2 à 10 jours, 3 à 7 jours, 3 à 5 jours, ou 2, 3, 5, 6, 7, 8, 9, 10 jours post-infection ou lorsque le virus sont plaqued sur Madin-Darby canine rein (MDCK) cells. Dans un mode de réalisation, la croissance d'un virus atténué de la grippe porcine de l'invention est comparé à une norme particulière ou une référence, par exemple, wild-type porcine A/Swine/Texas/4199-2/98 virus grippal. Conformément à ces modes de réalisation, le virus atténué mai être génétiquement manipulée pour contenir ou d'exprimer la non-porcine de l'acide nucléique du virus de la grippe de telles séquences, par exemple, un épitope d'un agent pathogène étranger ou d'un antigène tumoral. De préférence, les séquences non-virus de la grippe porcine ne comprennent pas une séquence d'acide nucléique qui altère le phénotype atténué du virus. En conséquence, séquences d'acide nucléique codant pour des protéines, polypeptides ou peptides à activité antagoniste d'interféron sont de préférence pas conçu dans le virus de la grippe porcine.

[0029] L'invention a atténué les virus de la grippe porcine comprenant un génome comprenant au moins deux, au moins trois, au moins quatre ou plusieurs mutations dans deux, trois, quatre ou plusieurs gènes du virus de la grippe porcine, dans lequel au moins une des mutations est en le gène NS1 et contribue à destination ou en est responsable (directement ou indirectement) pour l'atténuation du virus et / ou de la diminution de la capacité du virus de se mettre à dos une réponse interféron cellulaire. Dans un mode de réalisation, un virus atténué de la grippe porcine de l'invention comprend un génome comprenant au moins deux, au moins trois, au moins quatre ou plusieurs mutations dans deux, trois, quatre ou plusieurs gènes du virus de la grippe porcine, dans lequel au moins une des mutations est dans le gène NS1 et est responsable de la diminution de la capacité du produit du gène NS1 se mettre à dos une réponse interféron cellulaires, et permet au virus atténué, à une MOI comprise entre 0,0005 et 0,001, 0,001 et 0,01, 0,01 et 0,1, ou 0,1 et 1, ou une MOI de 0.0005, 0.0007, 0.001, 0.005, 0.01, 0.05, 0.1, 0.5, 1.0, 1.5, 2.0, 2.5, 3.0, 3.5, 4.0, 4.5, 5.0, 5.5 ou 6.0, pour passer à des titres entre les environ 1 à environ 100 fois, environ 5 à environ 80 fois, environ 20 à environ 80 fois, soit environ 40 à environ 80 fois, environ 1 à environ 10 fois, environ 1 à environ 5 fois, environ 1 à environ 4 fois, environ 1 à environ 3 fois, environ 1 à environ 2 fois, environ 3 à environ 15 fois, soit environ 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 ou 100 fois plus faible que wild-type de virus de la grippe dans les cellules (par exemple, les cellules d'un être humain (par exemple, PERC6, un producteur lignée de cellules dérivées de rétinoblastes embryonnaires humaines transformées par la région E1 de l'adénovirus 5),, la souris (telles que poulets, des fibroblastes d'embryons de poulet), le rat, les oiseaux, ou d'un porc (par exemple, PK (D1) des cellules, PK (15) cellules, PK13 cellules, les cellules de NSK, cellules LLC-PK1, cellules LLC-PK1A, ESK-4 cellules, les cellules ST, PT-cellules K75, PK-2a/CL 13 ou cellules SJPL)), tel que déterminé par, par exemple, les tests d'hémagglutination, environ 2 à 10 jours, 3 à 7 jours, 3 à 5 jours, ou 2, 3, 5, 6, 7, 8, 9, 10 jours post-infection lorsque les virus se propagent dans les mêmes conditions.

[0030] Dans un mode particulier, un virus atténué de la grippe porcine de l'invention comprend un génome comprenant au moins deux, au moins trois, au moins quatre ou plusieurs mutations dans deux, trois, quatre ou plusieurs gènes du virus de la grippe porcine, dans lequel au moins l'une des mutations dans le gène est NS1 et est responsable de la diminution de la capacité du produit du gène NS1 se mettre à dos une réponse interféron cellulaires, et permet au virus atténué, à une MOI comprise entre 0,0005 et 0,001, 0,001 et 0,01, 0,01 et 0,1 , soit 0,1 et 1, ou à une MOI de 0.0005, 0.0007, 0.001, 0.005, 0.01, 0.05, 0.1, 0.5, 1.0, 1.5, 2.0, 2.5, 3.0, 3.5, 4.0, 4.5, 5.0, 5.5 ou 6.0, pour passer à des titres compris entre environ 1 à environ 100 fois, environ 5 à environ 80 fois, environ 20 à environ 80 fois, soit environ 40 à environ 80 fois, environ 1 à environ 10 fois, environ 1 à environ 5 fois, environ 1 à environ 4 fois, soit environ 1 à environ 3 fois, environ 1 à environ 2 fois, environ 3 à environ 15 fois, soit environ 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 ou 100 fois plus faible que wild-type de virus de la grippe chez des cellules de porc, tel que déterminé par, par exemple, les tests d'hémagglutination , environ 2 à 10 jours, 3 à 7 jours, 3 à 5 jours, ou 2, 3, 5, 6, 7, 8, 9, 10 jours post-infection lorsque les virus se propagent dans les mêmes conditions (par exemple, dans cellules MDCK). Dans un autre mode de réalisation, un virus atténué de la grippe porcine de l'invention comprend un génome comprenant au moins deux, trois, quatre ou plusieurs mutations dans deux, trois, quatre ou plusieurs gènes du virus de la grippe porcine, dans lequel au moins une des mutations est en NS1 gène et est responsable de l'atténuation du virus, et permet au virus atténué, à une MOI comprise entre 0,0005 et 0,001, 0,001 et 0,01, 0,01 et 0,1, ou 0,1 et 1, ou à une MOI de 0.0005, 0.0007, 0.001, 0.005 , 0.01, 0.05, 0.1, 0.5, 1.0, 1.5, 2.0, 2.5, 3.0, 3.5, 4.0, 4.5, 5.0, 5.5 ou 6.0, pour passer à des titres compris entre environ 1 à environ 100 fois, environ 5 à environ 80 fois , environ 20 à environ 80 fois, soit environ 40 à environ 80 fois, environ 1 à environ 10 fois, environ 1 à environ 5 fois, environ 1 à environ 4 fois, soit environ 1 à environ 3 fois, environ 1 à environ 2 fois , environ 3 à environ 15 fois, soit environ 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70 , 75, 80, 85, 90, 95 ou 100 fois plus faible que wild-type de virus de la grippe chez des cellules de porc, tel que déterminé par, par exemple, les tests d'hémagglutination, environ 2 à 10 jours, 3 à 7 jours, 3 à 5 jours, ou 2, 3, 5, 6, 7, 8, 9, 10 jours post-infection lorsque les virus se propagent dans les mêmes conditions (par exemple, dans des cellules MDCK). Conformément à ces modes de réalisation, le virus a un phénotype atténué avec facultés affaiblies interféron antagoniste et mai être génétiquement manipulée pour contenir ou d'exprimer la non-virus de la grippe porcine séquences d'acides nucléiques, comme, par exemple, un épitope d'un agent pathogène étrangers (par exemple, les épitopes de porcins virus de syndrome reproducteur et respiratoire, le virus cytomégalovirus porcine, porcine coronavirus respiratoire, le virus de l'encéphalo porcine, de la diarrhée épidémique porcine et des déterminants antigéniques de la non-viral agents pathogènes comme les bactéries porcine, y compris, mais sans s'y limiter, Brucella suis, et de parasites, y compris, mais sans s'y limiter, les vers ronds (Ascaris suum), trichures (Trichuris suis), ou un antigène tumoral tels que l'antigène carcino-embryonnaire (ACE), l'antigène du cancer du sein, comme l'EGFR (epidermal growth factor receptor), l'antigène HER2 (P185^HER2), Neu épitope HER2, cancer antigen-50 (CA-50), cancer antigen 15-3 (CA15-3) associée au cancer du sein, cancer associated antigen (CAA), l'antigène de mélanome et le mélanome antigènes associés 100, 25, et 150). De préférence, les séquences non-virus de la grippe porcine (séquences hétérologues) ne comprennent pas une séquence d'acide nucléique qui altère le phénotype atténué du virus. En conséquence, séquences d'acide nucléique codant pour des protéines, polypeptides ou peptides à activité antagoniste d'interféron sont de préférence pas conçu dans le virus de la grippe porcine.

Continue ici:

http://www.patentstorm.us/applications/20090010962/fulltext.html

Thank Maria !

http://blogs.myspace.com/index.cfm?fuseact...logId=517002749

Et en plus court ça donne quoi :blush:

Bref ?

:blush: :)

Les liens vers 'Myspace' ont une traduction en bas de page (40 langues env.).

A part ça, il existe la barre 'Goût-'Gueule' pour les non-voyants qu'il suffit d'astiquer de temps à autre.

Moilà !

tout le monde n'as pas installe cette de barre google .

frustration, il y a toujours moyen d'exprimer sa colère : une alternative quoi...dans un monde où l'on n'a guère le droit de dire ce qu'on pense. Un refuge une affirmation de soi....qu'on existe , qu'on a un point de vue........mais S.V.P la foi n'est pas dans la gueule des femmes ni ailleurs que dans les c¿urs..S.V.P.. ça n'a rien à voir avec la foi, ni avec la religion ni avec l'islam.......l'islam est une religion méconnue.

Pour celles et ceux que ça intéresse...

http://www.nexus.fr/nexus_en_kiosque.php

C'est la crise, les médicaments sont des produits comme les autres, faut bien relancer la vente quel qu'en soit le prix... :blush:

Un livre parlait de ça (je ne me rappelle plus le nom là) qui disait que les dirigeants de certaines entreprises pharmaceutiques ont pour ordre de faire un retour sur investissement rapide de l'ordre des 20% si je me trompe pas. Pas étonnant que ce soit un peu la course au vaccin (et du coup vaccin fait un peu n'importe comment).

Faut arreté avec ce virus. Dans les autre pays , on ne parle plus de la grippe et je doit dire ( mais cela tous le monde le sait) i y'a plus de tué a cause de la grippe saisonière que de ce ptit virus! La vente du vaccin n'à que 1 point de vue : commercial !

Car la France s'est ruiné à acheté 92 million de vaccin et maintenant , on veu vous les faire acheté. Et bien je dit faite ce que vous volez mais moi je n'en voit pas l'utilité.

A noter également que le vaccin est fabriqué par la société Baxter, qui avait contaminé ces vaccins avec le HIV à une époque.